血型课堂创建于2008年11月27日
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检测具有某种血型抗体孕妇的胎儿血型基因型技术的最常用之处是帮助预测新生儿溶血病的危险。这种技术常用于RhD的检测,但也用于Rhc或K,偶尔用于其他血型。
通常胎儿DNA来源于通过羊膜穿刺术得到的羊水细胞以及绒毛膜取样获得的绒毛膜细胞。这两种技术都是侵入性的,有引起自发性流产的危险。并且20%的羊水诊断技术可以引起胎盘出血,这能促进母体抗体的产生,从而提高HDFN的发生率。
存在于母亲的血液中的胎儿DNA,占血浆总DNA的3%-6%。胎儿的RhD血型可以通过四个月孕期的Rh阴性孕妇血浆中胎儿DNA的检测来可靠地预测。这是避免不必要的侵入性检测的最好方法。
母亲血浆中的胎儿DNA
Taqman化学的实时定量PCR法是一种确定母亲血浆中胎儿DNA D表型的可靠方法(Fig.1)。Bristol的 IBGRL使用的实时定量PCR技术,包含Taqman引物和检测RHD而不是RHCE外显子4、5和10的引物。外显子10反应也可以检测RHDψ和RHCE-D-CES,而外显子4和5反应不能检测这两个“D阴性”基因。所有检测母亲血浆中胎儿DNA的试验都存在一个问题,提取的DNA中,混有大量的母体DNA,使内对照试验变得复杂。检测Y染色体连锁基因SRY的反应就包含在这个试验中,当胎儿是男性时,可以提供阳性结果。当结果提示是D阴性女性胎儿时,为了从胎儿而不是母体中得到阳性结果,我们可以检测包括DNA插入或缺失的8个多态性。也包括检测母体和胎儿DNA中CCR5的引物或探针,可以提示总的游离DNA存在的数量。如果存在许多母体DNA,这可以发生于在血浆分离以前就存在白细胞溶解时,那么胎儿DNA试验的敏感性可能会减弱。
RHD杂合性检测
如果要推测D阴性孕妇的胎儿D表型,可以通过父亲RHD杂合性来判断。RHD杂合性可以由血清学检测的Rh表型来推断,但这种方法在白种人中不是很精确,在黑种人中是不可行的。RHD的两侧有两9000bp,98.6%同源的Rh盒。在RHD缺失的D阴性单倍体中,形成两个Rh盒的杂合体。Rh盒杂合体的存在可以用序列特异引物PCR和PCR产物限制性内切酶消化的方法检测。这种方法需要进一步的确认。这种方法在白种人群中是可靠的,对于黑种人群还需更多的研究。另一种检测RHD杂合性的方法是应用实时定量PCR技术估计基因剂量。
ABO系统
从DNA推测ABO基因型是非常复杂的,部分原因是因为它涉及的变异数量较多,部分的原因是因为ABO基因并不直接编码血型抗原,而是编码催化它们合成的转移酶。为了得到合理精确的结果,需利用ASPs或限制性内切酶,检测O1和O1v等位基因外显子6中的单核苷酸缺失,与A/B多态性强烈相关的外显子7 SNPs中的一个SNP和与O2相关的外显子7SNP。杂合等位基因,含有O1外显子6序列和B外显子7序列的基因,可能引起错误的表型推测。
其他血型
许多其他临床重要血型的多态性由SNP产生,因此可以通过ASPs、限制性内切酶和直接测序来检测。这些血型包括:S/s,K/k,Kpa/ Kpb, Jpa/ Jpb, Fya/ Fyb, Jka/ Jkb, Dia/ Dib, Doa/ Dob 和Coa/ Cob,这些血型鉴定的复杂性来自于null表型的存在,Null表型往往由基因失活突变所引起,这种突变意味着尽管有编码但不产生抗原。这种现象通常比较罕见,但对于非洲血统S/s和Duffy多态性的个体以及波利尼西亚和芬兰血统Kidd多态性的个体,因给予重视。在Duffy系统中,Fya/ Fyb多态性由基因编码区域SNP确定,而在非洲人群Fy(a-b-)相关的沉默等位基因由基因启动子区的SNP确定。因此可以相对简单地设计检测这两种SNPs的方法。
展望 胎儿D表型产前筛查
预防妊娠期RhD免疫反应已越来越普遍,通常在孕期28-34周,给予抗D免疫球蛋白治疗。因为胎儿的D表型是不知的。而大约40%的孕妇(特别是白种人群)可能怀D阴性的胎儿,她们并不需要接受免疫球蛋白治疗。因此,适合所有D阴性孕妇的从孕妇血浆中胎儿DNA检测 D表型的高通量的方法是有价值的。这种技术由于可以避免抗D免疫球蛋白的浪费,具有经济效益。这对避免接受不必要治疗的D阴性病人来说是有利的。这种技术可能在今后几年里得到开发。